抗体回收利用

今天给大家分享抗体回收利用，其中也会对western抗体回收的内容是什么进行解释。

简述信息一览：

• 1、western一抗室温下孵育,还能回收么
• 2、吸收放散试验吸收试验的方法
• 3、回收的一抗怎么保存

western一抗室温下孵育,还能回收么

western一抗室温下孵育，能回收。据相关资料显示，一次Western结束后，可以回收稀释的一抗4摄氏度保存，用于下次Western实验。一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体，而不是磷酸盐。

该情况下抗原可以回收。当一抗在37度孵育时间过长时，虽然抗体仍然能够回收，但会对实验结果产生一些影响。长时间的高温孵育会导致抗体的部分失活，从而降低其与抗原的结合能力。此外，过长的孵育时间还会导致非特异性抗体的结合增加，进一步影响实验的特异性。

同时使用两种抗体是有前提的，需要抗体间是可以兼容的。最常见的是使用来自两个物种的一抗，比如鼠和兔，在一抗孵育时同时加入，二抗时同时加入针对一抗产生物种特异带有不同荧光素的二抗就可以。一抗依旧可以回收，只不过下次用还是可以同时探测到两种蛋白。

回收一抗，可重复使用。用1×TBST洗膜三次，每次5分钟。加入稀释好的二抗，室温平缓摇动1小时。用1×TBST洗膜三次，每次5分钟。 显色（或荧光扫描）对于DAB显色法，配制DAB显色液，将膜放置于显色液中，待条带显色清晰后，取出膜，用自来水冲洗终止显色。

回收一抗，用PBST洗涤膜3次，每次10分钟。用1×PBST或1×PBS稀释二抗至1：1000，将膜放入二抗中，室温摇床孵育1-2小时。用PBST洗涤膜3次，每次10分钟。显色 配制显色液（黑瓶：白瓶=1：1）。将膜放入显色盒中，滴加显色液孵育1分钟，避光操作。使用化学发光成像系统拍照，保存图片。

洗膜：一抗孵育完成后，将一抗回收并用TBST洗涤3次，每次5min。孵育二抗：提前配制好二抗（一般稀释比例为1：4000），将膜平铺于二抗中，室温孵育1h（注意二抗的属性来源是否正确）。洗膜、显影、定影 洗膜：将二抗弃掉，加入TBST进行洗膜，洗涤三次，每次5min。

吸收放散试验吸收试验的方法

在进行吸收放散试验时，首先进行冷吸收步骤。以已知抗原的盐水洗涤红细胞为起始，加入待检血清，混合均匀后放入4℃冰箱中吸收1到2小时，适用于A型、B型、MN、P系统等抗原的检测。另一方面，热吸收则用于Rh系统等，将混合液置于37℃水浴箱中，通过吸收过程区分真伪凝集反应：真凝集在吸收后凝集力减弱或变为阴性，而假凝集保持不变。

冷吸收 一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置 4℃ 冰箱吸收1~2小时 （ABO、MN、P血型系统等）。热吸收 一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置37℃水浴箱中吸收（Rh血型系统等）。

吸收放散试验中的吸收试验方法主要包括冷吸收和热吸收。冷吸收试验的方法： 起始材料：使用已知抗原的盐水洗涤红细胞。 混合：加入待检血清，混合均匀。 吸收过程：将混合液放入4℃冰箱中吸收1到2小时。 适用范围：适用于A型、B型、MN、P系统等抗原的检测。

吸收试验（absorption test）抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为吸收试验，对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收，吸收后抗体活性下降或消失，说明未知抗体中含有与已知抗原相对应的抗体。

进行吸收放散试验中的热放散试验时，需要注意以下事项：反应方法一致性：确保热放散试验的反应方法与原抗原抗体检测的方法一致，以保证试验结果的准确性和可比性。放散液制备：抗体强度考虑：若抗体强度较弱，可考虑使用酶处理红细胞作为试验放散液。

回收的一抗怎么保存

回收的一抗这么保存：存储温度：一般来说，一抗应该在-20°C或更低的温度下保存。这可以防止抗体的降解和失活。分装和冻干：如果你有足够的量，可以将一抗分装成小份，每份适合单次使用，然后进行冻干保存。这样可以避免多次冻融对一抗质量的影响。

回收的一抗的保存时间和温度，不同的抗体具有不同的稳定性和保存要求，回收的一抗保存在4°二个月左右。一抗回收液使用方法如下：将膜充分浸泡于适当体积的WesternBlot一抗二抗洗脱液中，室温摇床洗脱10-20分钟，时间长短请参考后面的说明进行优化，部分抗体的洗脱可能需较长时间，更有60分钟之久。

western一抗室温下孵育，能回收。据相关资料显示，一次Western结束后，可以回收稀释的一抗4摄氏度保存，用于下次Western实验。一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体，而不是磷酸盐。

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