免疫荧光一抗回收
本篇文章给大家分享免疫荧光二抗回收重复利用，以及免疫荧光一抗回收对应的知识点，希望对各位有所帮助。
简述信息一览：
正能生物-内参二抗
正能生物提供的内参抗体种类丰富，涵盖了细胞总蛋白内参（如GAPDH、β-actin和β-tubulin）、细胞核内参（如PCNA）、核膜内参（如Lamin B1）、线粒体内参（如Cox IV）、细胞膜内参（如Na/K-ATPase）以及针对植物的plant actin等，满足了不同实验需求。
广泛应用：正能生物的内参二抗适用于多种实验场景，包括蛋白纯化、功能研究以及Western Blot等，展现出广泛的应用前景。
正能生物为您提供一系列内参抗体，涵盖了常见的如GAPDH、β-actin、β-tubulin（适用于细胞总蛋白），以及专一的PCNA（核内参）、Lamin B1（核膜内参）、Cox IV（线粒体内参）、Na/K-ATPase（细胞膜内参）等，甚至包括针对植物的plant actin，适应多种物种和反应条件。
在选择二抗时，根据一抗的物种来源选择相应的二抗，如鼠源单克隆抗体配山羊或兔抗小鼠二抗。在特殊实验中，如双标实验，选择驴来源的二抗以同时匹配不同物种的抗体。内参选择时，避免千篇一律选择“GAPDH”或“β-Actin”，需根据内参蛋白在样本中的表达量进行选择。
内参配制方法：WB操作简单，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应是比较复杂的，因此用来测定表达产物时存在着一定的不确定性。所以，在WB实验设计中加入良好的参照体系，对实验结果分析是非常有帮助的。
免疫荧光染色的一抗,二抗分别用什么稀释?
PBS稀释。当然最好用封闭液直接稀释，再加一点TritonX100效果好。培养液成分太多了。而且固定之后细胞都死了，用培养液没什么意义，只要保证其pH等条件适合就好了。抗体说明书上都会有推荐的稀释倍数。上网查一下，有很多protocol。一般一比几百到一万都有，依抗体而定。可以4度过夜，这样染色效果好。二抗一般较便宜，一般1：50到1：200多。
BSA作为一种常用的封闭剂，其浓度范围通常在0.5%到2%之间，1%的浓度较为常见。在孵育一抗之前，应加入BSA进行封闭处理，封闭孵育完成后，在加一抗之前只需移除多余的液体，无需彻底清洗，这样可以避免一抗受到干扰。
洗涤：使用PBS轻柔洗涤抗体三次，每次10分钟，确保洗涤液完全覆盖切片，去除未结合的一抗。二抗孵育：加入荧光标记的二抗，在室温孵育1小时，使二抗与一抗结合，形成荧光复合物。洗涤：再次使用PBS轻柔洗涤三次，每次10分钟，彻底去除未结合的二抗，减少背景染色。
用1xPBS洗脱一抗三次，每次5分钟。将荧光二抗稀释后，室温下孵育2小时。用1xPBS洗脱荧光二抗三次，每次洗脱时间稍长。用含防淬灭的甘油封片，可按需对细胞核进行DAPI染色。晾干片子后，置于显微镜下观察，获取荧光图像。注意：实验过程中需严格控制操作条件和试剂质量，以确保实验结果的准确性和可靠性。
先用1×PBS洗三遍，将与一抗同种属的二抗用10% FBS PBS以1：500或1：1000稀释比例进行稀释，加入稀释好的二抗100μL/片，室温孵育1小时。DAPI染核：在二抗孵育结束后，用1×PBS洗三遍，加入DAPI 100μL/片，室温染核10分钟。
实战分享|细胞爬片免疫荧光实操分享
1、取出细胞爬片并洗涤 取出细胞爬片：小心地从培养皿中取出细胞爬片，注意避免损伤细胞。放置到新的培养皿中：将细胞爬片放到35mm或60mm的培养皿里。PBS洗涤：用PBS洗涤细胞爬片三遍，每次洗涤时轻轻晃动培养皿，然后倒掉PBS。注意加PBS时不要过于冲动，以免将细胞冲下。
2、细胞爬片免疫荧光实操步骤如下：清洗细胞爬片：将细胞爬片放入35mm或60mm的旧培养皿中。使用PBS溶液进行三次清洗，确保样本纯净，同时避免细胞流失。每次清洗时加入适量的PBS，轻轻晃动后倒出，无需长时间等待。固定细胞：将细胞爬片放入4%的冷多聚甲醛中固定20分钟。
3、在细胞爬片免疫荧光实验中，取出细胞爬片放入35mm或60mm的旧培养皿，使用PBS溶液进行三次清洗，以确保样本的纯净度。特别注意，清洗过程中应避免细胞的流失。清洗方法是加入适量的PBS，轻轻晃动后倒出，无需等待长时间。
关于免疫荧光二抗回收重复利用，以及免疫荧光一抗回收的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。
